[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分.[方法]采用EDC交联结合化学萃取法(液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1% Triton X-100± 1%脱氧胆酸钠±EDC交联±液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次± 1% TritonX-100± 1%脱氧胆酸钠)处理正常脊髓20根,得到脱细胞脊髓支架(支架组);对照于正常大鼠脊髓组织(对照组).通过HE染色检验支架组脱细胞效果,统计脱细胞脊髓支架的等级评分“优”、“良”、“一般”、“差”的百分比;选取HE染色脱细胞彻底、评分为“优”的脊髓支架,DAPI染色验证其内部细胞残留情况的等级评分是否一致为“优”;通过电镜扫描观察两组内部三维结构并分析其孔径;分析脊髓组织脱细胞处理前后的含水率、孔隙率、抗酶解性的变化;通过免疫组化的方法,观察两组材料细胞外基质中黏多糖分布情况.[结果]支架组通过HE染色观察到脱细胞彻底、评分为“优”的百分比为80%;HE染色观察评分为“优”支架经DAPI染色验证其内部细胞残留量评分也为“优”;其三维结构完整,其孔径均值为9.07 μm;含水率为(228.14±19.39)%;孔隙率为(71.82±2.10)%;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(35.904±1.9
作者:邢辉;任先军;蒋涛;阴洪;孙超;李邦银
来源:中国矫形外科杂志 2016 年 24卷 8期