目的:研究重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-mediated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)转染对体外培养人髓核细胞功能的影响.方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的人椎间盘髓核细胞,将构建好的rAAV-hTERT转染P2代体外单层培养的髓核细胞.用重组腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediated enhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作为标记基因观察细胞转染效率,按感染复数(multiplicity of infection,MOI) 103、104、105病毒基因组拷贝数/细胞(vector genomes/cell,v.g/cell)设组,流式细胞仪检测,筛选病毒转染的最佳MOI;设立rAAV-hTERT转染组、AAV空病毒转染组及空白细胞对照组,用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)方法检测rAAVhTERT转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)及酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)检测髓核细胞合成Ⅱ型胶原及蛋白多糖能力的变化.结果:rAAV-EGFP转染细胞后第7天时,MOI为105 v.g/cell组转染效率可达73.9％,明显高于

作者：吴剑宏；阮狄克；王德利；张超；何勍；王超锋；张燕；辛洪奎；顾韬；徐成；刘玥

来源：中国脊柱脊髓杂志 2012 年 22卷 9期