目的:探讨Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢(H2O2)诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响.方法:分离新生(24h内)SD大鼠脊髓,经消化、离心后重悬沉淀,差速贴壁30min后收集未贴壁细胞培养于Neurobasal培养基中,经免疫荧光鉴定呈03-tubulin阳性,确认为脊髓神经元.将脊髓神经元随机分为6组:空白组,细胞不予任何处理,正常培养;转染对照组,细胞转染阴性对照siRNA(si-NC);转染组,细胞转染Mettl3 siRNA(si-Mettl3);诱导组,细胞采用300μmol/L的H2O2处理;转染对照诱导组,细胞先转染si-NC,然后采用300μmol/L H2O2处理;转染诱导组,细胞先转染si-Mett13,然后采用300μmol/LH2O2处理.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞Mett13的mRNA表达水平,Western blot检测Mettl3、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平,免疫荧光检测Mett13表达,酶标仪检测各组整体m6A水平,并检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:与空白组相比,诱导组的m6A甲基化修饰水平显著提高(P＜0.05),Mettl3 的 mRNA 和蛋白表达水平显著性上调(P＜0.05),IL-1β(73.39±8.82ng/L vs 125.58±15.31ng/L)、IL-6(63.34±7

作者：李宏维；张海鸿

来源：中国脊柱脊髓杂志 2022 年 32卷 9期