目的 构建野生型及变异型apoptin的真核表达质粒pApoptin-EGFP、pM-apoptin-EGFP,并探讨其对人前列腺癌细胞系LNCaP、PC3的促凋亡作用.方法 采用PCR的方法从变异型apoptm质粒p3 × flag-m-apoptinmyc扩增出野生型apoption片段及变异型apoptin片段m-apoptin,将其定向克隆于pEGFP-N1载体的EcoRⅠ和Bam HI酶切位点之间,构建EGFP标记的野生及变异型apoptin真核表达质粒pApoptin-EGFP及pM-apoptin-EGFP,酶切、测序鉴定,RT-PCR、荧光显微镜分析融合蛋白表达,脂质体介导瞬时转染人前列腺癌细胞系LNCaP、PC3,流式细胞仪检测凋亡及细胞周期变化.结果 成功构建pApoptin-EGFP、pM-apoptin-EGFP重组质粒.并在被转染细胞检测到基因表达;瞬时转染后48h可检测到细胞凋亡,与空质粒组相比具有非常显著意义,细胞周期变化表现为G2/M期阻滞.结论 apoptin对雄激素依赖及非依赖型前列腺癌均具有明显的促凋亡作用,末端突变影响其促凋亡作用,为进一步探讨apoptin应用于前列腺癌的治疗奠定基础.
作者：王亚林；靳风烁；孙中义；张克勤；张尧
来源：中国男科学杂志 2008 年 22卷 12期
