目的 构建稳定表达乙肝病毒X基因(HBx)突变(C1653T、T1753C)的HepG2、Huh7细胞株,探讨突变点对肝癌细胞生物学行为的影响.方法 以含HBx的pLVX-HBx-IRES-tdTomato质粒为模板,点突变合成pLVX-HBxC1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒.双酶切和 Sanger测序的方法鉴定重组质粒的准确性.空白 HepG2、Huh7 细胞为对照组,pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVX-HBxC 1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒液感染HepG2、Huh7细胞,0.6μg/mL嘌呤霉素筛选单克隆细胞进行扩大培养.免疫染色和Western blot法检测X蛋白(HBX)的表达鉴定稳转株的构建;CCK-8法测定细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞中EMT相关信号分子的表达情况.两组间进行独立样本t检验.结果 双酶切和Sanger测序结果显示重组慢病毒质粒酶切后片段大小正确,点突变位置及碱基替换正确,成功构建pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVX-HBxC1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒.免疫染色及 Western Blot结果显示转染HBx及突变型的HepG2、Huh7细胞均有HBX表达,空白对照组均无HBX表达,成功获得稳定表达HBx、HBxC1653T和HBxT1753C的HepG2、Huh7细胞稳转株.增殖实验表明HBx及突变型均较对照组明显促进

作者：张翠芳；翟悦怡；隗和儒；李伟；王雪君；周辉芳

来源：中国热带医学 2023 年 23卷 10期