目的 将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用.方法 原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6～8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达.将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H2O2、SDS、溶菌酶、NaNO2、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况.结果 与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO2、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t3 h=0.082,t6h=0.174,t9h=0.355;NaNO2:t3h=0.950,t6h=1.274;低 pH:t3h=1.869,t6h=1.119,t9h=0.091;均P＞0.05);在 H2O2、SDS 压力条件

作者：杨雨婷；李玉洁；余海燕；杨国平

来源：中国人兽共患病学报 2023 年 39卷 6期