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本实验室已克隆到猪α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-GT, 第九外显子不全).其中pMD-3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子.本实验中利用LA-PCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,3-GT的第9外显子序列的扩增产物, 将片段克隆于pGEM-Teasy 载体.将5.0kb和2.0kb片段分别作为打靶载体的5′,3′同源臂,以neo为正选择标记基因,以GFP为负选择标记基因,构建敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLA-G1基因的的打靶载体p ZJ.经酶切图谱和测序结果的鉴定成功地构建出敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLA-G1基因的正负双向选择的打靶载体,为异种器官移植提供了很好的探索.
作者：周健；林爱星；陈永福
来源：中国生物医学工程学报 2005 年 24卷 4期
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