目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖(Polyribosylribitolphosphate,PRP)的ELISA检测方法.方法 用灭活的Hib菌免疫家兔,1周免疫4次,共免疫6周,采血,检测血清抗体滴度.对兔免疫血清进行非特异性抗体免疫吸附,纯化兔抗PRP抗体,用纯化的兔抗PRP抗体包被酶标板,HRP标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法检测PRP.确定标准曲线的最佳线性范围,并对方法进行特异性、准确性和精密性验证.结果 兔免疫血清的抗体效价可达1∶2 800.该方法的线性检测范围为0.030～0.500 ng/ ml,检测限为0.030 ng/ml.该方法检测大肠杆菌上清蛋白、牛血清白蛋白、LB培养基及破伤风-乙脑结合疫苗均无特异性反应；检测0.500、0.250、0.150 ng/ml的PRP标准品试验内变异系数(CV)在1.16％～2.40％之间,回收率在93.2％～107.2％之间；试验间CV在1.57％～4.11％之间,回收率在101.3％～101.6％之间.结论 该方法特异性、准确性和精密性均较好,可以特异性检测b型流感嗜血杆菌多糖.
作者：祝婧烨；沈坚；秦洁；马相虎；王维；瞿爱东
来源：中国生物制品学杂志 2011 年 24卷 11期
