目的 在大肠埃希菌中表达具有血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)/KDR(含激酶插入域的受体)特异性的重组人VEGF121KDR/白树籽核糖体失活蛋白(rGEL)融合毒素,纯化后检测其生物活性.方法 将rhVEGF121KDR/rGEL融合毒素全基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-VEGF121KDR/rGEL,转化大肠埃希菌Origami(DE3),IPTG诱导表达;表达的目的蛋白经SP-Sepharose FF、Ni-Sepharose FF纯化后,用凝血酶酶切,酶切产物经Q-Sepharose FF纯化;以细胞表面分别高表达VEGFR1/FLT1和VEGFR2/KDR的猪动脉血管内皮细胞PAE/FLT1和PAE/KDR为靶细胞,检测纯化的rhVEGF121KDR/rGEL融合毒素的细胞毒性.结果 重组原核表达质粒pET-32a(+)-VEGF121KDR/rGEL经双酶切和测序证实构建正确;表达的目的蛋白为标签蛋白硫氧化还原蛋白(thioredoxin,Trx)与rhVEGF121KDR/rGEL的融合蛋白,其相对分了质量约为62 000,蛋白呈可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的20％,去除标签蛋白的纯化rhVEGF121KDR/rGEL融合毒素相对分子质量约为43 000,纯度大于98％;VEGFR2阳性细胞PAE/KDR和VEGFR1阳性细胞PAE/FLT的半数抑制浓度(IC50)分别为0.32和278 nmol/L,后者为前者的800多倍.结论 已成功在大

作者：孙红琰；刘爱军；申云飞；李月；刘敏霞；武福军；申严杰；周满祥

来源：中国生物制品学杂志 2014 年 27卷 6期