目的 构建小鼠Fancd2os基因的真核表达质粒,并分析Fancd2os基因对人胚肾上皮细胞(HEK293T)增殖和凋亡的影响.方法 以小鼠睾丸组织DNA为模板扩增Fancd2os基因cDNA全长片段,并克隆至真核表达载体p3×FLAG-CMV-14,构建重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os.经LipofectamineTM 2000将重组真核表达质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中Fancd2os基因mRNA转录及蛋白表达情况;经CCK8法和流式细胞术分别检测过表达Fancd2os对HEK293T细胞增殖能力及紫外线诱导HEK293T细胞凋亡的影响.结果 经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os构建正确;转染p3×Flag-CMV-14-Fancd2os的HEK293T细胞可见Fancd2os基因mRNA转录及其蛋白表达;过表达Fancd2os的HEK293T细胞的增殖活性显著下降(P＜0.05);过表达Fancd2os可显著促进紫外线诱导的HEK293T细胞凋亡(P＜0.01).结论 成功构建了重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-Fancd2os,过表达Fancd2os可抑制HEK293T细胞的增殖,促进其凋亡.
作者：李婷；贾三三；温丽敏；白欣艳；王玉晶；王海龙；解军；郭睿
来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 6期
