目的 在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异.方法 将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体pPink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株pPink strain 1.重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性.经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况.通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列.结果 两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确.两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而MI6呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力.Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、△424S、D441 A、K452Q).结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得.提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造.
作者：杨旭；黄惟巍；姚宇峰；刘存宝；孙文佳；白红妹；马雁冰
来源：中国生物制品学杂志 2018 年 31卷 5期
