目的:探讨利用CRISPRi下调MDR1基因表达增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂敏感性的作用.方法:利用生物信息学技术预测MDR1基因启动子上潜在的CRISPRi干扰位点,设计干扰片段并构建重组载体,采用qRT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中MDR1基因mRNA以及蛋白表达水平,筛选干扰效率高的重组载体进行后续实验.将人肺癌A549/DDP细胞分为3组,分别为A549/DDP、Scrambed、sgRNA-MDR1-1,每组设置3个复孔.将各载体转染细胞48 h后,流式细胞术检测各组细胞外排情况,MTT法检测各组细胞的IC50值,激光共聚焦显微镜下观察各组细胞经顺铂处理后的细胞形态.结果:经测序比对,成功构建两种干扰MDR1基因转录的CRISPRi重组载体.转染A549/DDP细胞后,各转染组细胞MDR1基因mRNA以及蛋白水平均显著降低(P<0.01),其中sgRNA-MDR1-1的干扰效率最高,mRNA和蛋白水平干扰效率分别达60％和51％.与Scrambed组相比,转染sgRNA-MDR1-1组细胞的细胞外排能力降低(P<0.01),细胞对顺铂的IC50值显著降低(P<0.01),细胞内染色质聚集边缘化.结论:利用CRISPRi技术干扰MDR1基因表达能增强肺腺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性.
作者：刘凯；孙新迪；张伟伟；杨清竹；黄鑫；邵淑丽
来源：中国应用生理学杂志 2022 年 38卷 5期
