目的构建含有 p53蛋白结合位点的 p21或 survivin 基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒,并获得稳定转染的细胞模型用于抗肿瘤化合物筛选.
方法将含有 p53蛋白结合位点的 p21或 survivin 启动子区序列连接到 pGL4.17-basic 载体上,分别获得报告基因重组质粒 pGL4.17-p21和 pGL4.17-survivin;将两种重组质粒分别转染 A549细胞,经 G418筛选获得稳定转染细胞株 A549-p21和 A549-survivin;对该细胞模型进行条件优化,并将可调节 p53蛋白表达的多种抗肿瘤药物作用于稳定转染细胞,通过荧光素酶检测和 western blot 方法验证细胞模型用于药物筛选的可行性.
结果成功建立了分别含有 p21或 survivin 启动子报告基因的 A549-p21和A549-survivin 稳定细胞模型,多种抗肿瘤药物作用该细胞后能够通过调节 p53蛋白表达而影响报告基因荧光素酶活性.
结论构建的稳定转染细胞模型可以用于筛选以 p53为靶点的抗肿瘤化合物.
作者：王燕；李电东；邵荣光；王真
来源：中国医药生物技术 2012 年 5期
