目的 建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织.方法 将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19-T,构建重组质粒标准品,并纯化、定量及梯度稀释,分别建立B7-H4和GAPDH的标准曲线,应用实时荧光定量PCR检测8例人胃癌组织中的B7-H4相对于GAPDH的表达情况.结果 B7-H4的最低检测拷贝数为5.27拷贝,线性范围5.27×101 ～ 5.27 × 107拷贝,标准曲线方程y =-3.1395 x+41.805,直线回归相关系数r=0.994 904,批间变异系数范围2.39％ ～ 3.59％,扩增效率108.2％; GAPDH的最低检测拷贝数为38.6拷贝,线性范围3.86×102～ 3.86×107拷贝,标准曲线方程y=-3.2436x+ 41.083,直线回归相关系数r=0.998 913,批间变异系数范围2.26％～3.86％,扩增效率103.4％.8例人胃癌组织的B7-H4相对于GAPDHmRNA表达水平在0.044～0.888之间.结论 荧光定量PCR检测B7-H4的方法具备较高的敏感性和特异性,且系统有良好的重复性和线性范围.
作者：王琦；蒋敬庭；魏文祥
来源：中国医药生物技术 2013 年 8卷 2期
