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[目的]将人癌胚抗原(CEA)cDNA克隆到真核表达载体pIRES中,构建真核表达质粒pIRES-CEA,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA-HSP融合核酸疫苗作准备.[方法]从CEA阳性的大肠癌组织中提取总RNA,经RT-PCR方法获取人癌胚抗原cDNA,用内切酶Xba Ⅰ和Not Ⅰ分别酶切质粒pIRES和CEA cDNA,通过T4连接酶将带有黏性末端的CEA-cDNA插入到pIRES质粒的XbaⅠ和NotⅠ酶切位点上.[结果]通过PCR扩增获得了CEA基因,并将CEA-cDNA正向克隆到载体pIRES中.[结论]已经成功构建了真核表达质粒pIRES-CEA,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA-HSP融合核酸疫苗作准备.
作者：陈蓉明；应敏刚；郑秋红；蔡述华；龚福生
来源：中国肿瘤 2005 年 14卷 2期
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