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目的构建人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因重组质粒的克隆,获得具有抗原性的人MMP-1融合蛋白.方法从人肝组织提取总RNA,以此为模板,逆转录巢式PCR扩增MMP-1全编码区基因片段,构建含目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达MMP-1重组质粒菌,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定.结果经核苷酸序列测定和免疫印迹鉴定,成功地构建了人MMP-1重组质粒基因工程菌,并表达具有MMP-1抗原性的融合蛋白.结论构建了人MMP-1重组质粒克隆,获得了具有抗原性的MMP-1融合蛋白,这将有助于今后制备MMP-1多克隆抗体.
作者：侯珏；胡国龄；刘双虎；谭德明；欧阳颗
来源：中华传染病杂志 2003 年 21卷 4期
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