目的 探讨稳定表达重组转化生长因子-β3(hTGF-β3)对前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs)增殖及向成软骨方向定向分化的诱导作用.方法 免疫磁珠法分离纯化得到新生大鼠PSCs后,用线性化的聚乙烯亚胺转染pcDNA3.1(+)-hTGF-β3到体外单层培养的PSCs中,抗生素筛选使其稳定表达.采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)、流式细胞术(FCM)测定转染对PSCs增殖和DNA合成的影响,实时定量RT-PCR、免疫组化及Western blot方法比较转染后目的基因和软骨特异性标志物表达的情况.结果 hTGF-β3在分离纯化的PSCs中稳定表达.与未转染组细胞相比,转染后细胞DNA合成增多,增殖速度加快.PCR和免疫组化学结果表明,转染后软骨标志物基因上调明显,分泌软骨多糖基质及Ⅱ型胶原蛋白也明显增加.结论 通过hTGF-β3基因强化的PSCs可以稳定表达高效的hTGF-β3蛋白,从而促进PSCs的增殖并向成软骨方向分化,为软骨缺损的高效修复提供了新的思路.
作者：刘铁；李锋；游洪波；陈安民
来源：中华创伤杂志 2009 年 25卷 4期
