目的研究人端粒酶反转录酶催化酶亚单位(hTERT)基因对肝母细胞瘤细胞株体外生物学特性的影响.方法体外将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HepG2肝母细胞瘤细胞株,经G418及聚合酶链反应(PCR)筛选鉴定获得分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HepG2-s和HepG2-as.运用逆转录-PCR(RT-PCR)技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达及端粒酶的活性进行了检测;同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析了反义hTERT对肝母细胞瘤细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡.结果与空白对照组、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著降低HepG2细胞内源性hTERT mRNA的表达(n=10,t=7.61,P<0.01)和下调端粒酶活性.当各组细胞传至第20代后,与HepG2、HepG2-s比较,HepG2-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低(n=10,t=4.54,P＜0.01和n=10,t=3.96,P<0.01),同时伴有凋亡率的显著增加(n=10,t=9.24,P＜0.01和n=10,t=8.37,P＜0.01).结论反义hTERT体外可抑制肝母细胞瘤细胞的生长增殖能力,在抗肿瘤基因治疗中具有特异的靶向性和潜在应用的广谱性.
作者：刘磊；李成荣；孙来保；王国兵；王兵
来源：中华儿科杂志 2004 年 42卷 7期
