目的 探讨ITIH4基因表达下调对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学功能的影响.方法 设计4对ITIH4基因小分子干扰RNA(siRNA)片段,分别为ITIH4-546、ITIH4-795、ITIH4-917和ITIH4-1568,脂质体法瞬时转染ITIH4 mRNA高表达的卵巢癌细胞系HO8910pm细胞,荧光定量逆转录(RT) PCR技术检测转染后HO8910pm细胞中ITIH4 mRNA的表达,选择最佳沉默效应的siRNA干扰片段(即ITIH4-917),构建重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917质粒,转染H08910pm细胞,氨基糖苷类抗生素(G418)筛选,获得稳定转染细胞系pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917-HO8910pm细胞,用于以下实验.实验分为3组,即重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917质粒转染HO8910pm细胞组(ITIH4-917转染组)、空载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒转染HO8910pm细胞组(空载体组)、阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-NC质粒转染HO8910pm细胞组(阴性对照组),采用荧光定量RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测3组细胞中ITIH4 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组细胞的增殖情况[以吸光度(A)值表示],流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期比例,体外集落形成实验检测3组细胞的集落形成情况,穿膜(transwell)小室体外侵袭实验检测3组细胞的体外迁移、侵袭能力(以A值表示

作者：黄敏；王琪；张玮；黎丹戎；李力

来源：中华妇产科杂志 2013 年 48卷 1期