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目的 研究重组甲胎蛋白(AFP)特异性T细胞的体外抗肝细胞癌免疫活性及其机制.方法 实验分为:空白对照HepG2组;CD8+T+AFP空载组;CD8+T+AFP过表达组;CD8+T+AFP空载+ JAK2抑制剂组;CD8+T+AFP过表达+JAK2抑制剂组.分离、鉴定DC细胞,构建AFP腺病毒并转染树突状细胞(dendritic cells,DC),活化AFP特异性的CD8+T细胞,检测CD8+T细胞对人肝癌细胞HepG2的影响.采用CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;ELISA法检测IL-2、IL-6、IL-6、IL-10、IFN-γ(人干扰素γ)、TNF-α、PFP(穿孔素)、granzyme B(颗粒酶)表达情况;蛋白印迹检测p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2、Bax/Bcl-2、Fas/Fasl表达情况.结果 实验显示,AFP特异性CD8+T细胞体外能有效抑制HepG2细胞增殖,上调IL-2、IFN-γ、TNF-α、PFP、granzyme B、Bax/Bcl-2的表达水平,显著抑制T细胞活化的负调控因子IL-10及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2表达.结论 活化的AFP特异性T细胞能显著抑制肝细胞癌增殖.其抗肿瘤机制可能是重组AFP腺病毒活化、促进T细胞增殖,通过升高Bax/bcl-2和促进穿孔素/颗粒酶通路并特异性杀伤HepG2.JAK2抑制剂在该机制中起到一定调控作用.

作者:刘扬;王跃如;丁光辉;杨庭松;姚乐;钱明平;张柏和;吴孟超;Lisa H. Butterfield

来源:中华肝胆外科杂志 2015 年 21卷 7期

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作者:
刘扬;王跃如;丁光辉;杨庭松;姚乐;钱明平;张柏和;吴孟超;Lisa H. Butterfield
来源:
中华肝胆外科杂志 2015 年 21卷 7期
标签:
肝细胞癌 甲胎蛋白 树突状细胞 腺病毒 转染 Hepatocellular carcinoma Alpha fetoprotein Dendritic cell Adenovirus Transfection
目的 研究重组甲胎蛋白(AFP)特异性T细胞的体外抗肝细胞癌免疫活性及其机制.方法 实验分为:空白对照HepG2组;CD8+T+AFP空载组;CD8+T+AFP过表达组;CD8+T+AFP空载+ JAK2抑制剂组;CD8+T+AFP过表达+JAK2抑制剂组.分离、鉴定DC细胞,构建AFP腺病毒并转染树突状细胞(dendritic cells,DC),活化AFP特异性的CD8+T细胞,检测CD8+T细胞对人肝癌细胞HepG2的影响.采用CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;ELISA法检测IL-2、IL-6、IL-6、IL-10、IFN-γ(人干扰素γ)、TNF-α、PFP(穿孔素)、granzyme B(颗粒酶)表达情况;蛋白印迹检测p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2、Bax/Bcl-2、Fas/Fasl表达情况.结果 实验显示,AFP特异性CD8+T细胞体外能有效抑制HepG2细胞增殖,上调IL-2、IFN-γ、TNF-α、PFP、granzyme B、Bax/Bcl-2的表达水平,显著抑制T细胞活化的负调控因子IL-10及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2表达.结论 活化的AFP特异性T细胞能显著抑制肝细胞癌增殖.其抗肿瘤机制可能是重组AFP腺病毒活化、促进T细胞增殖,通过升高Bax/bcl-2和促进穿孔素/颗粒酶通路并特异性杀伤HepG2.JAK2抑制剂在该机制中起到一定调控作用.

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