目的:构建DEK基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体，并探讨其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:采用RNAi技术，根据DEK基因的干扰序列，合成Oligo DNA,退火形成双链DNA，将其克隆到酶切后的小干扰RNA表达载体pLKO.1上，构建重组慢病毒载体pLKO.1-sh hDEK，经293T细胞包装，收集病毒上清液，感染细胞。采用实时逆转录PCR（RT-PCR）和免疫蛋白印迹法（Western blot）检测人肝癌细胞Bel-7402、Huh-7、SMMC-7721和HepG2中DEK的表达及感染慢病毒的各组细胞中DEK的敲低效率。分别通过细胞计数试剂盒-8（CCK8）增殖实验、流式细胞术、划痕实验检测细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡及迁移能力。两组间均数比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。 结果:酶切鉴定和DNA测序结果证实，重组慢病毒载体pLKO.1-sh hDEK1及pLKO.1-sh hDEK3构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示，肝癌细胞Bel-7402和Huh7中DEK的表达较高，pLKO.1-sh hDEK3能更有效地抑制DEK基因的表达（ P < 0.05），因此选择pLKO.1-sh hDEK3重组慢病毒感染肝癌细胞Bel-7402和Huh7进行后续的功能实验。CCK8细胞增殖实验结果显示肝癌细胞Bel-7402和Huh7感染重组慢病毒后，细胞增殖能力与空白对照及阴性对

作者：李术华；侯宇；陈哲；吴韦铷；吴传新；孙航

来源：中华肝脏病杂志 2020 年 28卷 10期