目的：观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对生存素转录的调控作用及对A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）检测生存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA 实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA HIF-1α质粒和阴性（错义链）、内参（β-肌动蛋白）微小 RNA（miRNA）质粒转染 A549细胞。转染分为未处理组（正常A549细胞）、HIF-1α沉默组（转染HIF-1α miRNA质粒）、阴性对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果最佳的miRNA HIF-1α干扰载体；常氧、缺氧条件下检测各组中HIF-1α、生存素在mRNA和蛋白水平的变化；用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果（1）γ-32P 标记的生存素启动子序列-26～-9 bp与A549细胞核蛋白作用，该条带可与HIF-1α抗体结合产生特异性抗体结合条带；（2）常氧下 HIF-1α沉默组的 HIF-1α和生存素 mRNA 分别为0.313±0.051和0.060±0.008，明显低于未处理组的1.042±0.036和1.0
作者：舒红梅；赵成岭；孙艳；李伟；陈余清
来源：中华临床医师杂志（电子版） 2014 年 4期
