目的 观察大豆异黄酮对负载于脱细胞羊膜上的软骨细胞增殖及其胰岛素样生子因子-1 (IGF-1) mRNA基因表达的影响,为组织工程软骨的临床应用奠定基础.方法 无菌条件下酶消化法分离、培养新生兔软骨细胞;酶消化法和物理法无菌制备脱细胞羊膜;取第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜上.实验组分别加入含10-9、10-8、10-7mol/L的大豆异黄酮DMEM/F-12培养液,对照组为DMEM/F-12培养液.亚甲蓝染色观察羊膜经酶消化法结合物理法脱细胞的程度、倒置显微镜下观察分离的软骨细胞及其复合到羊膜上的形态,甲苯胺蓝染色观察软骨细胞与脱细胞羊膜的复合.MTT法检测各组软骨细胞增殖率,RT-PCR方法定量检测各组软骨细胞IGF-1 mRNA基因表达量.结果 原代分离、贴壁的软骨细胞多呈三角型、梭型,培养至5d时,铺满瓶底,呈“铺路石”状.亚甲蓝染色显示羊膜脱细胞后膜上未见异染蓝色细胞.第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜1d后,可见部分软骨细胞伸出伪足,细胞呈圆形或三角形.甲苯胺蓝染色显示软骨细胞复合在脱细胞羊膜上4d后,细胞形态无明显改变,形态多为三角型和梭型,基质蓝染,细胞核呈深蓝色.10-9、10-8、10-7 mol/L 3个浓度的大豆异黄酮在软骨细胞接种到脱细胞羊膜上4d后均能促进负载于羊膜上的软骨细胞的增殖,并且10-7mol/L浓度的大豆异
作者：郭小明；赵文君；白人骁；邢国胜
来源：中成药 2014 年 36卷 5期
