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目的 建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞(HSF),探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响.方法 脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立稳定转染克隆细胞系.用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达.通过SA β-gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖能力.结果 成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调(P＜0.01).SA β-gal染色结果显示,转染组衰老细胞百分比(13.47％±1.01％)与对照组(18.10％±0.66％)相比降低(P＜0.05),MTT检测结果显示,转染组细胞增殖能力较对照组加快(P＜0.05).结论 抑制p53表达能够延迟HSF的衰老,促进细胞增殖.
作者：陈文琦；许惠娟；毕志刚
来源：中华皮肤科杂志 2012 年 45卷 11期
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