目的 应用实时荧光定量PCR结合突变阻滞形成系统(RT ARMS-qPCR)技术检测线粒体DNA A3243G突变负荷,并探讨线粒体脑肌病伴高乳酸血症和脑卒中样发作(MELAS)综合征患者不同组织中A3243G突变负荷的分布情况.方法 分别构建含线粒体DNA3243位点的野生型(A)和突变型(G)序列的质粒,将这2种质粒按一定比例混合构建成13个含有不同A3243G突变负荷的标准对照,应用PCR-限制性片段多态性技术(RFLP)和RT ARMS-qPCR技术检测13个标准对照及存在A3243G突变的7例MELAS患者、1名携带者以及53名健康对照的外周血、肌肉、毛发及尿沉渣等组织的A3243G突变负荷.结果 标准对照的突变负荷经PCR-RFLP和RT ARMS-qPCR检测的结果均与预期值呈直线相关,决定系数分别为R21=0.885、R22=0.991,RT ARMS-qPCR检测的结果更接近预期值;7例MELAS患者及1名携带者不同组织的突变负荷经RT ARMS-qPCR检测的结果比经PCR-RFLP检测出的高,且RT ARMS-qPCR比PCR-RFLP更容易检测出低负荷的A3243G突变,并发现MELAS患者的肌肉、尿沉渣、头发的A3243G突变负荷均高于外周血.结论 应用RT ARMS-qPCR可以快速、灵敏、准确地检测不同组织的A3243G突变及其突变负荷.
作者：林晓贞；陈万金；王柠；吴志英；林珉婷；慕容慎行
来源：中华神经科杂志 2009 年 42卷 3期
