胰岛素对烫伤血清诱导骨骼肌成肌细胞凋亡的调控作用-临床诊疗知识库

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作者：

马丽；柴家科；申传安；迟云飞；冯瑞；邓虎平

来源：

中华烧伤杂志 2011 年 27卷 5期

标签：

烧伤成肌细胞,骨骼肌细胞凋亡胰岛素 1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白 Burns Myoblasts,skeletal Apoptosis Insulin 1-phosphatidylinositol 3-kinase Protein kinase B

目的探讨胰岛素对烫伤大鼠血清诱导大鼠骨骼肌成肌细胞株L6凋亡的调控作用及机制.方法体外培养L6细胞,按照随机数字表法分为对照组、烫伤血清组、胰岛素组和烫伤血清+胰岛素组.在上述4组细胞培养液中分别添加体积分数20％正常大鼠血清、体积分数20％烫伤大鼠血清、体积分数20％正常大鼠血清+100 nmol/L胰岛素、体积分数20％烫伤大鼠血清+100 nmol/L胰岛素,孵育48 h.行Hoechst 33258染色,于倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并计数凋亡细胞；行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测细胞磷酸化(p一)蛋白激酶B(Akt)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bax、Bcl-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase-3)的蛋白表达量.对实验数据行组间或配对t检验.结果 (1)倒置荧光显微镜下可见,烫伤血清组凋亡细胞为每视野(59.6±3 9)个,显著多于对照组、胰岛素组、烫伤血清+胰岛素组[每视野(4 9±2.6)、(5 5±2 1)、(19.7±2 3)个,t值分别为28.53、29.86、21.53,P值均小于0.01].(2)流式细胞仪检测结果显示,烫伤血清组细胞凋亡率为(18.5±1.8)％,明显高于对照组、胰岛素组及烫伤血清+胰岛素组[(1.1±0 6)％、(1 5±0 3)％、(7.8±0.6)％,t值分别为22.41、22 83、13 92,

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