小干扰RNA特异靶向沉默RRM2基因对人肝癌细胞HepG2的生物学影响-临床诊疗知识库

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作者：

陈辉；瞿丽；黄永刚；谢达飞

来源：

中华实验外科杂志 2012 年 29卷 10期

标签：

RNA干扰 RRM2基因癌,肝细胞 RNA interference RRM2 gene Carcinoma,hepatocellular

目的观察RNA干扰沉默RRM2基因表达对人肝癌细胞HepG2细胞生物学影响,并探讨其分子机制.方法利用小RNA干扰(siRNA)技术沉默HepG2细胞中RRM2基因的表达,用采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot技术检测RRM2 mRNA及蛋白的表达；用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测siRNA-RRM2对HepG2细胞增殖的影响；用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-RRM2对HepG2细胞迁移能力的影响；采用Western blot技术检测抗凋亡蛋白B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2),促凋亡蛋白bax和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平变化；建立成瘤模型每组10只,观察RRM2基因沉默后对移植瘤生长的影响.结果 siRNA-RRM2有效沉默HepG2细胞中RRM2表达；CCK-8法结果显示与对照组比较下调RRM2基因抑制HepG2增殖[(41.20±2.13)％比(91.35±10.22)％]；Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因后,显著抑制了HepG2的迁移能力(21.20±1.28比132.50±7.88)；Western blot结果显示抗凋亡蛋白bcl-2下调,促凋亡蛋白bax上调,Cyt-C上调；体内实验证实下调RRM2组肿瘤体积明显小于对照组,到第8周时,siRNA-RRM2组肿瘤体积为(171.13 ±28.12) mm3,对照组为(1487.41±168.20) mm3.结论 siRNA-RRM2能显著抑制RRM2基因在人肝癌细胞HepG2中的表达,部分逆转HepG2的恶性

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