细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建-临床诊疗知识库

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作者：

陈仁富；程伟松；程乾；李连涛；方琳；刘俊杰；温儒民；李望；郑骏年

来源：

中华实验外科杂志 2012 年 29卷 10期

标签：

条件增殖腺病毒细胞核增殖抗原启动子细胞核增殖抗原基因人端粒酶逆转录酶基因 RNA干扰 Conditionally replicative adenovirus Proliferation cell nuclear antigen promoter Proliferation cell nuclear antigen Human telomerase reverse transcriptase RNA interference

目的构建细胞核增殖抗原(Ki-67)启动子调控表达Ki-67基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因小干扰RNA(siRNA)的条件增殖腺病毒.方法 (1)合成hTERT-siRNA插入pSilencer3.1,构建pShTERTsiRNA质粒.(2)分别酶切Ki-67启动子质粒pZKi-67、Ki-67-siRNA质粒pZD55-Ki-67-siRNA,获得Ki-67启动子片段和Ki-67-siRNA片段并连接,构建质粒pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA.(3)以pShTERT-siRNA为模板,PCR获得hTERT-siRNA及H1启动子片段,克隆进pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA,构建质粒pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA-hTERT-siRNA.(4)将其与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染293细胞,9 ～12d后出现病毒空斑.提取重组腺病毒DNA,行聚合酶链反应(PCR)鉴定.结果病毒ZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA-hTERT-siRNA构建成功,其包含Ki-67启动子、Ki-67-siRNA、hTERT-siRNA 片段.结论成功构建Ki-67启动子调控荷载Ki-67、hTERT双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒,为研究靶向肿瘤治疗奠定基础.

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