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目的 构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人转化生长因子β3(hTGF-β3)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hTGF-β3基因,构建TGF-β3基因和报告基因EGFP基因真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计法测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3酶切后显示空载体和hTGF-β3基因片段长度分别为5 300 bp和1 251 bp,PCR扩增hTGF-β3基因片段长度为1 251 bp,紫外分光光度计法测定空载体和含hTGF-β3基因的质粒浓度分别为382 mg/L和411 mg/L,测序证实pIRES2-EGFP-hTGF-β3载体序列正确.结论 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3,可为后续的骨修复基因治疗的研究奠定基础.
作者：何武兵；张旭鸣；许志贤；林世水；许玮
来源：中华实验外科杂志 2014 年 31卷 10期
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