目的:探讨金属硫蛋白-1G(MT1G)在肝细胞癌(HCC)恶化过程中发挥的调节作用及调节机制。方法:利用无标记定量蛋白质组学技术比较MT1G过表达与参照细胞株之间蛋白质组差异;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、胸腺嘧啶核苷类似物染色试剂盒(EDU法)观察细胞表型变化;利用蛋白质印迹法(Western blot)检测相关信号通路关键因子表达量变化。样本间的比较采用
t检验进行统计分析。
结果:首先成功构建出MT1G过表达细胞株。经质谱(MS)鉴定结果表明与参照细胞比共有182种蛋白在MT1G过表达细胞中出现表达量差异有统计学意义(阈值≥5.0倍或≤0.2倍,且
P<0.05)。GO分析显示这些差异表达蛋白(DEPs)可能参与细胞周期调控和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路。定量聚合酶链反应(PCR)验证表明与参照细胞比,MT1G在MT1G过表达细胞中上调表达,差异均有统计学意义(294.9±33.3)倍(
t=8.837,
P<0.01);吡多醛激酶(PDXK)上调表达(34.02±2.59)倍(
t=13.148,
P<0.01);UBX结构域蛋白7(UBXN)上调表达(19.08±0.47)倍(
t=40.652,
P<0.01);跨膜蛋白9家族成员4(TM9S4)上调(8.91±0.43)倍(
t=20.485,
P<0.01),这些结果与MS鉴定结果趋势一致,差异
作者:潘隽永;王高雄;欧阳家和;黄天从;王艳军;李新丰
来源:中华实验外科杂志 2020 年 37卷 3期