目的:探究微小RNA(miRNA,miR)-487a-3p对脑胶质瘤细胞(U-87 MG)的增殖、迁移和侵袭能力的调控作用及信号通路机制。方法:利用GEO2R分析工具对基因表达数据库(GEO)的数据集(GSE165937)进行比较分析获得差异表达miRNA。通过定量聚合酶链式反应(qPCR)在HA1800和U-87 MG细胞系中检测miR-487a-3p的表达水平。通过在U-87 MG细胞中转染miR-487a-3p模拟物(miR-mimic)上调其表达并应用qPCR进行验证。分别通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和总蛋白激酶B(t-Akt)的表达水平,通过计算比值评价各组细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的激活水平。两组间比较采用
t检验进行统计学分析。
结果:共有62个差异表达miRNA(Log2│差异倍数│>2,
P<0.05),其中上调9个,下调53个,miR-487a-3p在肿瘤组中表达水平显著下降(Log2差异倍数=-2.527,
P<0.01)。与HA1800细胞比较,在U-87 MG细胞中miR-487a-3p的表达显著下调(0.090±0.022比1.000±0.205,
t=7.659,
P<0.05)。在U-87 MG细胞中转染miR-mimic可以显著上调miR-487a-3p的表达(
作者:黄薇薇;杨福伟
来源:中华实验外科杂志 2023 年 40卷 10期