目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)对缺氧后人肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激的影响,探讨Cyr61对HK-2的保护机制.方法 将HK-2细胞分为5组:空白组、Cyr61处理组、MAPK抑制剂组(Cyr61+ PD98059预处理)、p38抑制剂组(Cyr61 +SB203580预处理)、PI3K抑制剂组[Cyr61+渥曼青霉素(Wortmannin)预处理].各组细胞预处理12h后进行缺氧培养.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测缺氧前后细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,双氯荧光黄乙酸乙酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成量,比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,Western印迹法检测细胞磷酸化(p)Akt及细胞核内Nrf2蛋白表达水平. 结果 缺氧培养后空白组HK-2细胞内ROS含量和Nrf2蛋白表达增加,SOD、CAT活性下降,同时细胞存活率下降,凋亡率增高(均P＜0.05).Cyr61处理组缺氧后存活率、细胞内SOD、CAT活性和p-Akt、Nrf2蛋白显著高于空白组,同时其凋亡率及ROS含量明显低于空白组(均P＜ 0.05).与Cyr61处理组相比,缺氧后PI3K抑制剂组HK-2细胞存活率、细胞内SOD、CAT活性和p-Akt、Nrf2蛋白显著下降,凋亡率及ROS含量显著增加(均P＜0.05);而MAPK抑制剂组和p38抑制剂组HK-2细胞的各项指标同Cyr61处理组相比差异无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 Cyr

作者：徐岩；沈学飞；宋年华；刘雪梅

来源：中华肾脏病杂志 2014 年 30卷 7期