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目的 构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用高保真PCR和T-A克隆法,从金黄葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增并克隆了不含信号肽序列的sea基因.采用突变引物PCR构建sea基因定位突变体.建立sea基因及其定位突变体原核表达系统.Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白.采用TCID50法测定目的重组蛋白对Vero细胞的细胞毒性.采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的重组蛋白促小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果 所克隆的sea基因核苷酸序列与报道序列的相似性为100
作者：范芳华；严杰；毛亚飞
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2007 年 27卷 6期
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