目的 探讨人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因(HSV-tk/GCV)系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用.方法 实验研究.利用分子克隆技术,构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV-tk/GCV系统并进行慢病毒包装.分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞(RPEC)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)、293T细胞中转人此系统,3d后观察4组细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况,并收集HLEC和RPEC,通过RT-PCR检测HSV-tk的表达差异.20 mg/L丙氧鸟苷(GCV)作用后,CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk/GCV系统对HLEC和RPEC的杀伤作用.采用单因素方差分析Scheffe两两比较法对各组RPEC活性进行比较.结果 HSV-tk/GCV系统在RPEC、NIH3T3、293T细胞中EGFP表达效率分别为62.3％,68.3％,75.8％；在HLEC中EGFP表达效率为17.5％.RT-PCR检测显示HLEC内有较高的HSV-tk表达,相对灰度值为4.01,而RPEC中HSV-tk表达微弱,相对灰度值为0.29.20 mg/L GCV作用72 h后流式细胞仪检测:HLEC组的细胞凋亡率为76.51％,而RPEC组仅为2.44％.CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况显示:20 mg/L GCV作用72 h后LEP503调控的HSV-tk/GCV转染的RPEC活性0.9198 ±0.06与正常RPE组0.9672±0.02和阴性对照RPE组0.8927±0.07相比,差异无统计学意义

作者：蒋永祥；卢奕；刘天津；杨晋；吴新华

来源：中华眼科杂志 2012 年 48卷 9期