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目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法设计短发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6+1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western 印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术(TUNEL)观察其体外的促凋亡作用.构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红(HE)染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原(PCNA)法评价细胞的增殖能力.结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证.pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28.24
作者：陈道荣；王丕龙；黄爱龙；张秉强
来源：中华医学杂志 2006 年 86卷 22期
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