目的 对比分析分离人脐带间充质干细胞(MSCs)常用方法的效果,筛选比较高效的分离方法.方法 采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织(n=15),充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜,将其剪碎至1 mm3的组织块,洗涤离心确定组织块的总体积,平均分为4组,分别采用组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法,分离获得人脐带MSCs,行锥虫蓝染色计数细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态;使用免疫荧光染色检测细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD31、CD44、CD45、人类白细胞抗原I(HLA-I)和人类白细胞抗原Ⅱ类分子(HLA-DR)的表达情况,进行细胞鉴定;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖曲线.结果 组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法4种方法均可分离获得干细胞,但获得细胞的数量和增殖能力不同.4种方法获得的细胞数量分别为(5.44±0.21)×105、(4.03 ±0.24)×105、(4.91 ±0.33) ×l05和(5.94 ±0.40)×105,胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著多于其他3种方法,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).组织块法种植后第9～11天观察到细胞在组织块周围生长,而其他3种方法种植后第2天即可见贴壁生长的细胞.4种方法细胞达到90％ ～95％融合的时间分别为(18.5
作者：刘玲英；柴家科；段红杰；侯玉森；尹会男；郁永辉；胡泉；郝岱峰；冯光
来源：中华医学杂志 2013 年 93卷 32期
