目的:探讨敲除和过表达外源性RNA结合蛋白38(RNPC1)基因后,人表皮生长因子受体2( HER-2)阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗敏感性的变化。方法采用慢病毒转染法敲除和过表达RNPC1基因,采用实时荧光定量PCR法检测各组BT474细胞中RNPC1和HER-2 mRNA的表达, Western blot法检测RNPC1和HER-2蛋白以及PI3K/AKT蛋白的表达。以不同浓度的曲妥珠单抗处理各组BT474细胞,采用流式细胞术检测各组BT474细胞的凋亡率,细胞计数试剂盒8( CCK-8)法检测生长抑制率。以20μg/ml曲妥珠单抗处理各组BT474细胞,采用Western blot法检测各组BT474细胞中凋亡相关蛋白的表达。结果实时荧光定量PCR和Western blot法检测结果均显示,RNPC1过表达后, RNPC1和HER2 mRNA及蛋白的表达均增高;而敲除RNPC1基因后, RNPC1和HER2 mRNA及蛋白的表达均降低。 RNPC1的过表达能减少BT474细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白的表达;RNPC1的敲除能增加p-PI3K和p-AKT蛋白的表达。5、10、15、20和25μg/ml曲妥珠单抗处理敲除实验组BT474细胞48 h后的生长抑制率分别为(9.67±1.18)%、(21.67±1.23)%、(30.33±1.25)%、(40.33±1.69)%和(53.00±1.63)%,均明显低于相应浓度曲妥珠单抗处理的敲除对照组[分别为(14.00±0.8
作者:李春莲;周旭婕;娄培培;夏添松;石靓;王莹;丁强
来源:中华肿瘤杂志 2016 年 38卷 3期