目的 通过腺病毒介导BMP2及BMP7基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中共表达,探讨大鼠BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性,以及能否有效表达重组人源BMP2/7异源二聚体蛋白.方法 3只10周龄雄性Fischer大鼠,取其骨髓组织分离纯化BMSCs,并以贴壁法体外传代培养.同时构建并包装制备携带BMP2或BMP7靶基因的高滴度重组腺病毒备用.取体外培养的第3代BMSCs,按10 000个/cm2的细胞密度接种于6孔培养板,细胞贴壁培养过夜.实验组细胞加入无血清培养液稀释的携带BMP2和BMP7靶基因的腺病毒液各100μl(病毒感染复数分别为100 MOI),而对照组细胞加入感染复数亦为200 MOI的携带GFP基因的阴性对照腺病毒液.细胞培养第7天后,收集该条件细胞培养上清,经抗人BMP7抗体交联的G蛋白亲合层析柱滤过,以获取抗体特异性免疫蛋白沉淀,用于Western Blot及ELISA检测BMP2/7异源二聚体的有效体外表达.结果 成功构建携带有BMP2或BMP7目的基因的质粒载体并经HEK293T细胞包装成复制缺陷型重组腺病毒,Western Blot检测观察到BMP2在55 000大小处呈现有阳性目的条带,而目的基因BMP7则表现在49 000大小处有阳性条带;以阴性对照腺病毒Ad-GFP感染大鼠BMSCs 48 h,镜下见BMSCs贴壁良好,未见细胞毒性现象;荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的显著表达;腺病
作者：高涛；唐胜建；牛常英；苗春雷；张伟；周陆陆；吴彩风；刘方军
来源：中华整形外科杂志 2016 年 32卷 2期
