目的:通过超声靶向微泡破裂(ultrasound targeted microbubble destruction ,UTMD)法介导基因转染,观察RNA干扰对宫颈癌HeLa细胞survivin基因的沉默效应和诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,将其和微泡共同处理后加入HeLa细胞并予以超声辐照,以空白细胞、单纯质粒、单纯超声辐照、质粒+超声辐照和质粒+Lipofectamine转染作为对照;采用荧光显微镜和FCM法评估基因转染效率,同时对超声辐照参数进行优化;应用FCM法和Hoechst染色及DNA ladder分析法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测survivin mRNA水平的变化.结果:经酶切鉴定及测序分析证实重组质粒构建成功.HeLa细胞采用UTMD处理后,基因转染率显著增加(P＜0.01),并在超声强度为1.0 W/cm2、辐照3 min的条件下最为显著(P＜0.01).PT-PCR检测结果显示,质粒与微泡共同作用加超声辐照组的survivin mRNA抑制率为(83.33±2.73)
作者：陈智毅；梁琨；谢明星；张静
来源：肿瘤 2009 年 29卷 7期
