目的:研究长链非编码 RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GATA6反义 RNA1(GATA6 antisense RNA 1,GATA6-AS1)调控 GATA6 表达对胃癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药细胞SGC7901/5-FU增殖、凋亡及转移的影响,并探讨可能的作用机制.
方法:以亲本SGC7901细胞和SGC7901/5-FU细胞作为对照组,采用Lipofectamine 2000 将空载体 pcDNA3.1、重组载体 pcDNA3.1-GATA6-AS1、shNC 和 shGATA6-AS1 分别转入 SGC7901/5-FU 细胞,使 GATA6-AS1 过表达或沉默表达.采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中GATA6-AS1和GATA6mRNA的表达情况.各组细胞经5-FU处理后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖的能力,细胞划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,FCM法检测细胞的凋亡能力.随后采用蛋白质印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、Caspase 3和GATA6蛋白的表达水平,再用α-鹅膏菌素处理后的细胞用于检测GATA6 mRNA的稳定性;RNA pull-down实验检测GATA6-AS1与GATA6之间的相关性.最后用Balb/c裸鼠建立SGC7901细胞移植瘤模型,分组与体外实验分组相同;经5-FU治疗后,观察各组裸鼠的肿瘤生长情况并计算抑瘤率.HE染色后观察各组移植瘤组织病理学的变化情况,蛋白质印迹法检测各组裸鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原(prolife
作者:葛宁;姜媛媛;潘中平;万杰
来源:肿瘤 2023 年 43卷 12期