目的 构建强力霉素诱导型重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察强力霉素诱导凋亡素基因表达的情况及对人结肠癌细胞的影响. 方法 构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE-VP3.调节载体pRevTet-on和表达载体pRevTRE-VP3分别转染PT67包装细胞后,收集包装好的病毒依次感染人结肠癌细胞系Lovo,用抗生素筛选出抗性细胞株Lovo/on-vp3.通过向培养液中加入或去除强力霉素调控凋亡素基因在Lovo/on-vp3细胞中的表达,Annexin V-FITC/PI双染色后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率. 结果 经酶切和测序鉴定,重组逆转录病毒载体pRevTRE-VP3构建成功,并添加了kozak序列.筛选出可经四环素调控凋亡素基因表达的人结肠癌细胞株Lovo/on-vp3,经PCR和RT-PCR证实凋亡素基因已整合入细胞DNA,并得到了表达;Lovo/on-vp3细胞在1 mg/L强力霉素培养环境中培养24h、48 h和72 h凋亡率明显高于无强力霉素环境中相同时间点的细胞凋亡率,两者差异有显著性. 结论 凋亡素基因经RevTet系统导入人结肠癌细胞Lovo后,在强力霉素诱导下可表达凋亡素蛋白并诱导Lovo细胞凋亡.并随诱导时间延长凋亡素蛋白表达增加、细胞凋亡增多.
作者：王娜；朱惠明；杨俊文；黄勋
来源：肿瘤防治研究 2010 年 37卷 2期
