[目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin.[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatincDNA,并定向克隆入真核表达载体pSecTag2C中.用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞.培养48h后,对转化的COS7细胞行PCR和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用.[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatincDNA片段.测序结果显示,克隆的canstatincDNA长684bp,序列与文献报道一致.从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Western-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达.MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖.[结论]构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin.
作者：单志新；林秋雄；余细勇；刘媛；符永恒；谭虹虹；郑猛；林曙光
来源：中山大学学报（医学科学版） 2004 年 25卷 z1期
