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目的 构建糖类标记载体筛选克隆.方法 以pPIC9K-βG12为模板,通过PCR扩增得到全长的Bgl2基因片段,克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),cel-M9培养基筛选阳性克隆,经DNA测序分析,成功构建pET28a-Bgl2表达载体.SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的 蛋白,其相对分子质量与预期结果 相符.结果 PCR扩增得到Bgl2基因片段,SDS-PAGE显示蛋白以包涵体形式表达,克隆可用Cel-M9培养基筛选.结论 用Cel-M9培养基筛选出阳性克隆为构建食品级载体奠定基础.

作者:李泰明;庄舰峰;Jean Louis Didier MEKOO;谷春娇;邢芸;刘景晶

来源:安徽医药 2012 年 16卷 5期

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作者:
李泰明;庄舰峰;Jean Louis Didier MEKOO;谷春娇;邢芸;刘景晶
来源:
安徽医药 2012 年 16卷 5期
标签:
黑曲霉 β-葡萄糖苷酶 纤维二糖
目的 构建糖类标记载体筛选克隆.方法 以pPIC9K-βG12为模板,通过PCR扩增得到全长的Bgl2基因片段,克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),cel-M9培养基筛选阳性克隆,经DNA测序分析,成功构建pET28a-Bgl2表达载体.SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的 蛋白,其相对分子质量与预期结果 相符.结果 PCR扩增得到Bgl2基因片段,SDS-PAGE显示蛋白以包涵体形式表达,克隆可用Cel-M9培养基筛选.结论 用Cel-M9培养基筛选出阳性克隆为构建食品级载体奠定基础.

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