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目的 构建白色念珠菌3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)的表达载体并使其在大肠杆菌中正确表达.方法 提取基因组总RNA,PCR方法获得GAPDH基因,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-GAPDH,转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生蛋白,用SDS-PAGE和Western Blotting检测GAPDH蛋白表达情况.结果 构建的白色念珠菌GAPDH基因表达质粒经序列测定证实,与GenBank数据完全一致.双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET-32a(+)载体.在1.0 mmol·L-1的IPTG浓度诱导下表达,可观察到相对分子量51kDa的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blotting检测证实为GAPDH蛋白.结论 实验成功克隆白色念珠菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中正确表达,为白色念珠菌感染的候选疫苗奠定工作基础.
作者：赵珊梅；袁雪岩；石建峰；李昂；苗群爱
来源：北京口腔医学 2013 年 21卷 5期
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