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目的: 构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64重组质粒,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白. 方法: 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出MPT64基因片段,插入pGEM-T-easy载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pProEX HTb中,在大肠杆菌DH5α中表达. 结果: 获得结核分枝杆菌MPT64成熟蛋白基因,经序列测定与GenBank公布的序列完全一致;表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量与文献报道一致;重组蛋白经蛋白印迹实验,在Mr 2.6×104位置有特异条带. MPT64蛋白在宿主菌中表达量约占菌体总蛋白的13.5
作者：柏银兰；李元；李别虎；薛莹；范雄林；徐志凯
来源：第四军医大学学报 2003 年 24卷 1期
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