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目的：克隆和表达结核分枝杆菌抗原 MPT64，并分析其免疫活性。方法：以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组 DNA 为模板，PCR 扩增 mpt64基因，克隆至 T 载体 pMD18-T，转化入 E.coli DH5α，菌落 PCR 鉴定阳性克隆并测序分析。将测序正确的 pMD18-T-mpt64的 mpt64基因亚克隆至表达载体 pET-28a，构建重组质粒 pET-28a-mpt64，转化 E.coli BL21中，PCR 和双酶切鉴定阳性重组子，IPTG 诱导 MPT64表达，亲和层析纯化，western-blot 分析其免疫活性。结果：成功构建 pET28a-mpt64重组表达质粒，表达、纯化获得分子量约为26kDa 的 MPT64，并能被结核病人血清识别。结论：克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌 MPT64蛋白。
作者：蒋华科；袁仕善；谢琳；郭靖玮；任琪琪
来源：湖南师范大学学报（医学版） 2016 年 13卷 2期
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