目的:构建结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因疫苗并对其在体外进行表达. 方法:用PCR技术从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增cfp10基因,以HindⅢ和EcoRⅠ双酶切后克隆入含esat6基因的pGEM-7zf(+)载体中,将测序正确的esat6-cfp10融合基因按照BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体转染CHO细胞,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达. 结果:PCR获得的cfp10基因序列与文献报道一致,大小约为350 bp. 重组真核表达质粒酶切后可获得约630 bp的融合esat6-cfp10基因片段. RT-PCR可获得大小约为350 bp的cfp10基因,间接免疫荧光检测后表达有Esat6-Cfp10蛋白的阳性细胞着染. 结论:成功克隆结核分枝杆菌cfp10基因,构建了融合有esat6-cfp10基因的真核表达质粒并对其在体外进行了表达.
作者：张海；师长宏；薛莹；姜泓；高雪；柏银兰；王丽梅；徐志凯
来源：第四军医大学学报 2005 年 26卷 3期
