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目的 在大肠杆菌中表达阿尔茨海默病(AD)相关肽段Aβ与具有强助溶作用的麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,从而经济有效地获得具有天然免疫原性的Aβ肽段,为深入研究AD的发病机理和治疗药物提供重要的物质基础.方法 用PCR法扩增Aβ的基因片段,并将其插入到含有麦芽糖结合蛋白的融合表达载体pMAL-c2中,经测序后再将重组质粒转化人大肠杆菌TB1中进行诱导表达.经多聚麦芽糖亲和色谱的纯化获得MBP-Aβ融合蛋白.再用SDS-PAGE及Western blotting鉴定Aβ及其融合蛋白的表达和免疫原性.结果 测序结果 证实插入的DNA片段与Aβ序列一致.SDS-PAGE电泳显示Aβ融合蛋白被高效表达.Western blotting结果 表明Aβ及其融合蛋白可被其特异性抗体识别.结论 在大肠杆菌中高效表达了可溶性的Aβ融合蛋白并经纯化和酶解后获得了Aβ纯肽段,为AD病机理的研究及其病理模型的建立提供了物质基础.

作者:朱瑞;郑传东;王方

来源:南方医科大学学报 2010 年 30卷 3期

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作者:
朱瑞;郑传东;王方
来源:
南方医科大学学报 2010 年 30卷 3期
标签:
阿尔茨海默病 APP Aβ 原核表达 融合蛋白 Alzheimer's Disease APP Aβ prokaryotic expression fusion protein
目的 在大肠杆菌中表达阿尔茨海默病(AD)相关肽段Aβ与具有强助溶作用的麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,从而经济有效地获得具有天然免疫原性的Aβ肽段,为深入研究AD的发病机理和治疗药物提供重要的物质基础.方法 用PCR法扩增Aβ的基因片段,并将其插入到含有麦芽糖结合蛋白的融合表达载体pMAL-c2中,经测序后再将重组质粒转化人大肠杆菌TB1中进行诱导表达.经多聚麦芽糖亲和色谱的纯化获得MBP-Aβ融合蛋白.再用SDS-PAGE及Western blotting鉴定Aβ及其融合蛋白的表达和免疫原性.结果 测序结果 证实插入的DNA片段与Aβ序列一致.SDS-PAGE电泳显示Aβ融合蛋白被高效表达.Western blotting结果 表明Aβ及其融合蛋白可被其特异性抗体识别.结论 在大肠杆菌中高效表达了可溶性的Aβ融合蛋白并经纯化和酶解后获得了Aβ纯肽段,为AD病机理的研究及其病理模型的建立提供了物质基础.

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