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目的 探讨长链非编码RNA H19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制.方法 采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control 组、si H19 组、si Creb1 组、Mimic control 组、miR-181c-5p mimic 组、Inhibitor control 组、miR-181c-5p inhibitor 组、si H1 9+Inhibitor control 组和 si H19+miR-181c-5p inhibitor 组共 11 组.干扰 H19 表达后,ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化,CCK8法检测LCs增殖变化;生物信息学分析预测各基因的结合位点.RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化.结果 (1)与si control组比较,si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后,P<0.01).(2)各相关基因之间存在结合位点.(3)与DMSO组比较,2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H19表达明显升高,而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01).(4)与 si control 组比较,si H19 处理可显著下调 LCs 的 H19、Creb1、HSD3B1 和 HSD3B6 RNA 表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P

作者:陈勇;邓华;李鑫;范丽玲

来源:福建医科大学学报 2023 年 57卷 4期

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作者:
陈勇;邓华;李鑫;范丽玲
来源:
福建医科大学学报 2023 年 57卷 4期
标签:
H19 睾丸间质细胞 睾酮 cAMP反应元素结合蛋白1 3β-羟基类固醇脱氢酶 信号转导和转录激活因子1 H19 Leydig cells testosterone cAMP response element binding protein 1 3β-hydroxysteroid dehydrogenase signal transduction and activator of transcription 1
目的 探讨长链非编码RNA H19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制.方法 采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control 组、si H19 组、si Creb1 组、Mimic control 组、miR-181c-5p mimic 组、Inhibitor control 组、miR-181c-5p inhibitor 组、si H1 9+Inhibitor control 组和 si H19+miR-181c-5p inhibitor 组共 11 组.干扰 H19 表达后,ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化,CCK8法检测LCs增殖变化;生物信息学分析预测各基因的结合位点.RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化.结果 (1)与si control组比较,si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后,P<0.01).(2)各相关基因之间存在结合位点.(3)与DMSO组比较,2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H19表达明显升高,而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01).(4)与 si control 组比较,si H19 处理可显著下调 LCs 的 H19、Creb1、HSD3B1 和 HSD3B6 RNA 表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P

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