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目的：基于等位基因特异性PCR（allele-specific PCR，AS-PCR）技术，建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA（mtDNA） SNP的方法。方法基于AS-PCR原理，选择20个mtDNA编码区SNP位点，分为两组，分别标记FAM和HEX荧光，每个位点设计具有长度差异的两条上游（下游）等位基因特异性引物以及一条下游（上游）通用引物。结合AS-PCR技术和毛细管电泳，检测200份无关个体血样。各位点随机选取至少3个样本进行直接测序验证，并进行单倍型频率调查。结果200份血样均得到清晰分型，各位点的检测结果与直接测序结果完全一致。10μL体系下，DNA最低检测浓度为0.2 pg，当模板量为0.5~5 pg时能得到较为理想的分型图谱。在200名无关个体中，共分出15种单倍型，单倍型多样性为0.9060。结论 AS-PCR技术是一种简单、快速且有效的mtDNA SNP分型方法，适用于法庭科学检验的需求。
作者：聂燕钗；张晨；刘亚楠；黄江平；焦海涛；吴丹；周怀谷
来源：法医学杂志 2014 年 2期
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